Estudiamos el efecto antimicrobiano de los extractos de pimiento en medio líquido

Los experimentos que llevamos a cabo hace unas semanas para estudiar el posible efecto antimicrobiano de los extractos de pimiento en medio sólido dieron resultados negativos. Recordamos: impregnábamos discos de papel de filtro con nuestros extractos y los colocábamos sobre una placa con medio de cultivo inoculada con las bacterias de prueba. E igualmente lo hicieron aquellos encaminados a comprobar este efecto en la capsaicina mediante esta misma técnica. Y eso a pesar de que la literatura científica describe el efecto inhibidor que este compuesto responsable de la acrimonia de los pimientos ejerce sobre el crecimiento de los microorganismos. Y planteábamos entonces qué podríamos hacer para resolver estas incógnitas.

Funcionamiento de un espectrofotómetro Shimadzu

El pasado jueves llevamos a cabo nuevos experimentos. En este caso para estudiar este posible efecto inhibidor del crecimiento pero en esta ocasión en medio líquido. El fundamento de esta prueba consiste en que cuando cultivamos bacterias en medio líquido, a medida que se multiplican, el medio se vuelve turbio; tanto más cuando mayor es el número de bacterias que en él han crecido. Y esta turbidez la podemos medir con un aparato llamado espectrofotómetro. Éste consta de un emisor de luz, cuya longitud de onda (color) podemos seleccionar, y que hacemos pasar a través de una cubeta en la que ponemos la muestra a medir. En nuestro caso usamos luz de una longitud de onda de 600 nm, la más apropiada para medir crecimiento bacteriano. Un detector medirá la cantidad de luz absorbida por el cultivo y nos devolverá el dato en la pantalla. Para calibrar el aparato utilizamos un blanco que consiste en medio de cultivo sin inocular;  con este ajustaremos el aparato hasta que veamos aparecer el valor 0 en la pantalla. De esta forma, restaremos la posible absorción de luz por el medio de cultivo de modo que las diferencias que indique en las medidas se deberán al mayor o menor crecimiento de las bacterias. 

Para llevar a cabo nuestros experimentos preparamos tubos con 5 ml de medio de cultivo estéril TSB (caldo de soja y tripticaseína, similar al usado en los experimentos anteriores pero sin el agar que lo gelificara). Inoculamos los tubos con 20 microlitros de cultivos líquidos de nuestras bacterias de prueba en fase estacionaria, Escherichia coli y Bacillus subtilis e hicimos dos lotes.  A uno de ellos no le añadimos nada, sería nuestro control para medir cuánto eran capaces de crecer nuestras bacterias sin nada que les impidiese su desarrollo. Al otro lote le añadimos 50 microlitros de los extractos de pimientos e igualmente 50 microlitros de capsaicina en etanol 0,05M. Incubamos en una estufa a 28ºC durante 20 horas y procedimos a medir en un espectrofotómetro Shimadzu UV 120-02.

 

Los resultados de las medidas se muestran en la tabla siguiente (pulsar sobre ella para acceder a los resultados de una manera más clara):

Para cada tipo de pimiento habíamos preparado dos tubos con los cultivos de bacterias. La tabla muestra los valores de absorbancia para cada uno de ellos y el valor medio (columna con fondo amarillo), para las cinco variedades de pimientos que utilizamos en nuestros experimentos así como para cultivos a los que habíamos añadido también 50 microlitros de capsaicina 0,05M. Bacillus subtilis creció dando lugar a grumos en el medio de cultivo. Intentamos, sin mucho éxito, disgregar estos grumos mediante agitación; los valores de absorbancia obtenidos se muestran en las columnas centrales. Se dejaron sedimentar los grupos durante un par de horas y se repitieron las medidas, de modo que solo se valoraran las bacterias en suspensión. Estos datos se muestran en las tres columnas de la derecha. 

En la tabla anterior la primera serie de datos muestra las lecturas que obtuvimos en el espectrofotómetro. Los datos inferiores muestran los valores referidos a nuestros controles, los cultivos sin tratamiento con los extractos. Indican la proporción, considerando 1 la absorbancia de los cultivos sin tratar. Recordemos que cuanto menor sea la absorbancia mayor habrá sido el efecto inhibidor de los extractos.

Pues bien, es ahora el momento de analizar y discutir estos resultados. ¿Qué conclusiones podemos sacar de ellos? ¿Se comportan igual nuestras bacterias ante los extractos? Y nuestros pimientos ¿inhiben de igual modo los cultivos en medio líquido? Si no es así, ¿cuál presenta mayor capacidad antimicrobiana? ¿Presenta ahora la capsaicina actividad antimicrobiana? ¿Cuáles serían nuestros siguientes pasos? Esto son tan solo algunas de las muchas preguntas que nos podemos plantear y a las que debéis de dar respuesta en los comentarios de esta entrada.